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本制品是一种主要用于低分子量蛋白(2～40kDa)检测的聚丙烯酰胺预制凝胶，采用Tris-Tricine电泳缓冲系统，仅需60～70分钟即可完成电泳并获得非常平整锐利的条带。本预制胶有1.5厘米高的浓缩胶，具有非常优良的分离效果，电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利，几乎没有边缘效应；同时本预制胶胶板为玻璃材质，减少了对蛋白的非特异性吸附，电泳效果非常好，达到甚至超过了自配PAGE胶的电泳效果；兼容市场上主流的小型电泳槽，常用于PAGE和Western检测。

本预制胶使用略偏碱性pH的Tris缓冲液制备，具有较低的pH值，尽可能地减少了蛋白质修饰，适用于变性蛋白电泳。

本预制胶使用Tris-Tricine缓冲系统的SDS-PAGE电泳液，推荐使用10×Tricine-SDS-PAGE阴极电泳缓冲液和10×Tricine-SDS-PAGE阳极电泳缓冲液，或参考使用说明自行配制相应的电泳液。本预制胶电泳后可以使用Tris-Glycine缓冲系统的转膜液进行转膜，推荐使用Western转膜液。

• 本制品具有超高分辨率。本预制胶最小可分离1.7kDa的蛋白。
  
• 本制品使用安全、便捷。本预制胶无需配制，即开即用，去掉梳子即可上样，而传统的PAGE配制凝胶繁琐费时，并且制胶时还会接触有毒和刺激性试剂。
  
• 本制品质量稳定。本预制胶采用高品质玻璃胶板，和塑料胶板相比，大大减少了胶板对蛋白的吸附，电泳效果更好。本制品采用自动化的灌胶生产技术，品质稳定可靠，重复性好，不同批次的产品一致性高。
  
• 本制品电泳效果好。本预制胶的蛋白质分离效果极佳，蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利，转膜效率高。
  
• 本制品电泳槽兼容性好。本预制胶兼容市场上主流的小型电泳槽，如Bio-Rad公司的Mini-PROTEAN Tetra Cell电泳槽、Life公司的XCell SureLock Mini-Cell电泳槽(需与特制挡板配合使用)、以及上海天能、北京六一等的mini胶电泳槽或其它胶板宽度在10厘米的电泳槽。
  
• 本制品电泳时间短。本预制胶推荐的电泳电压和电泳时间为150V 40～50分钟，即可完成电泳并获得非常平整和锐利的电泳条带。具体的电泳时间可以根据溴酚蓝的电泳位置或实验的具体需求进行确定。
  
• 本制品取出凝胶极为便捷。只需用刀片在玻璃胶板一侧轻轻划一下即可，并且玻璃胶板打开极为方便，无需特殊的起撬工具。

Tricine-SDS-PAGE (基于Tris-Tricine缓冲系统)通常用于分离质量范围为1～100kDa的蛋白质。它是分辨小于30kDa的蛋白质首选的电泳系统，对于从生物膜中分离膜蛋白复合物也很有帮助。在传统的Glycine-SDS-PAGE (也被称为Laemmli-SDS-PAGE，基于Tris-Glycine缓冲系统)中，随着电泳的进行，浓缩胶中来自样品和电泳液中SDS的游离的十二烷基硫酸根(DS)离子持续累积，并与小分子量蛋白的结合，阻碍了小分子量蛋白的分离，从而导致条带模糊和分辨率降低，干扰小分子量蛋白的固定和染色。在Tricine-SDS-PAGE中，凝胶缓冲液的pH值较低，并在电泳缓冲液中用Tricine替代Glycine，尽可能地降低了DS离子与小分子量蛋白的结合，使小分子蛋白很好地分离，呈现了更清晰的条带和更高的分辨率。同时，Tricine的pKa值为8.15，Glycine的pKa值为9.6，由于pKa的变化，两种方法对高或低分子量蛋白质的分辨率也各不相同。Glycine-SDS-PAGE的凝胶可以分离高分子量蛋白质(20～200kDa)，但即使是使用较高的丙烯酰胺(Acrylamide)浓度的凝胶(4～20%梯度凝胶)，小于20kDa的蛋白质也较难清楚地分离和扩散。相比之下，Tricine-SDS-PAGE只能用于分离低于100kDa的蛋白质，尤其是20kDa或更低分子量的蛋白质或多肽可以通过这种方法很好地分离。此外，Tricine-SDS-PAGE有助于在蛋白质印迹过程中轻松转移疏水性蛋白质，适用于从二维凝胶中分离疏水性蛋白质以进行质谱分析。

• 由于本预制胶保质期较短，需新鲜制备，在您确认订购后约5个工作日才能发货。
  
• 本预制胶不能置于0℃以下冷冻，否则凝胶会冻裂。
  
• 内槽电泳液和转膜液建议新鲜配制，试剂纯度不够、反复使用或长期放置的缓冲液会降低电泳效果。
  
• 本预制胶为了兼容几乎所有厂家的小型凝胶电泳槽，所以改进了与电泳槽U型硅橡胶密封条的吻合结构(如Bio-Rad等公司的电泳槽)。建议在电泳时须将具有突起结构的U型硅橡胶密封条取出后反过来安装，使其没有突起的平滑面朝外，从而防止漏液，见下图。一般内槽电泳液加满，外槽电泳液没过电泳槽底部的阳极即可，并且电泳结束后的电泳缓冲液可以作为外槽缓冲液重复使用1～2次。另外，部分公司都已经配套无突起结构的U型硅橡胶密封条，使用这样的U型硅橡胶密封条就不会出现内外槽之间的漏液现象。
  
  图1．Bio-Rad等公司的电泳槽U型硅橡胶密封条的突起结构图。由于本预制胶的该部位是平的，使其兼容几乎所有厂家的小型胶电泳槽，所以电泳时须将具有突起结构的硅橡胶密封条(左图)取出后反过来安装(右图)，使其没有突起的平滑面朝外，从而防止漏液。
  
• 由于本PAGE预制胶比Life公司的XCell SureLock Mini-Cell电泳槽配套的NuPAGE Gel或Novex Mini Gel略薄，所以需加特制挡板配合使用。如有需要，请在订购本制品时告知，百奥莱博会免费赠送该特制挡板。
  
• 转膜时，建议将转膜液中的乙醇或甲醇含量提高至20%～30%，以提高小分子蛋白的转膜效率。同时建议使用0.22μm的印迹膜进行转膜(货号：YTB1204、YTB1206)。

• 样品准备：将样品和2×Tricine SDS上样缓冲液按1:1混合，95℃加热5分钟，以充分变性蛋白。
  
• 将BoGel低分子量蛋白预制胶从包装袋中取出。
  
• 将预制胶固定在电泳槽中，平稳、缓慢地拔出梳子。
  
• 配制电泳缓冲液：推荐使用10×Tricine-SDS-PAGE阴极电泳缓冲液和10×Tricine-SDS-PAGE阳极电泳缓冲液，或按下面配方进行配制。
  
  • 1×阴极电泳缓冲液：100mM Tris Base，100mM Tricine，0.1% SDS，pH8.2～8.3。
    
  • 1×阳极电泳缓冲液：200mM Tris-HCl，pH8.9。
• 内槽加满阴极电泳缓冲液，外槽加入阳极电泳缓冲液没过电泳槽底部的阳极即可。
  
  • 由于预制胶孔中有残留的储存缓冲液，所以建议用1mL移液枪吸取电泳液轻轻吹打加样孔，将加样孔冲洗干净，去除气泡和残留的储存缓冲液，这样电泳的效果更佳。
• 上样：将10μL吸头的尖端垂直方向轻轻插入到上样孔中即可上样，枪头避免戳破凝胶，更不能使胶板变形导致样品泄漏。
  
  • 最佳上样量须通过实验来确定，样品过量较易导致条带拖尾和信号过强。
• 将电泳槽盖子盖好，并将电源线插头插入电泳仪电源插孔(红对红，黑对黑)。一般在150V电压，电泳40～50分钟左右即可，或溴酚蓝条带电泳至凝胶近底部或实验预定的位置。如果需获得更加平整和锐利的条带，可以把电压调整为100-150V，此时电泳时间需要适当延长。实际电泳时间与电泳液质量、凝胶数量等因素有关系，需自行适当调整。
  
• 取出玻璃胶板，将刀片从玻璃胶板一侧轻轻划一下，稍加用力慢慢扳开或用刮板轻轻撬开玻璃胶板，用刮板将凝胶取出。
  
• 转膜：推荐使用Western转膜液。转膜时，建议将转膜液中的乙醇或甲醇含量提高至20%～30%，以提高小分子蛋白的转膜效率。同时建议使用0.22μm的印迹膜进行转膜。通常湿转的电流为300-400mA，转膜30～60分钟。

• 蛋白电泳示踪染料溴酚蓝扭曲、电泳大幅扭曲、电泳时间大幅度延长：
  可能原因是内槽缓冲液泄漏而导致。建议重新夹一下胶板，防止在电泳过程中内槽液面逐步降低。
  
• 使用自己配制的电泳缓冲液与上样缓冲液电泳后条带较模糊：
  本预制胶pH为略偏碱性，对电泳缓冲液和上样缓冲液的要求比传统pH8.8的分离胶要高，缓冲液配制不当，或长期放置变质，都会对本预制胶的蛋白电泳效果产生影响。推荐使用10×Tricine-SDS-PAGE阴极电泳缓冲液和10×Tricine-SDS-PAGE阳极电泳缓冲液。
  
• 在上样时不可将枪头过度插入上样孔中，枪头的过度插入会使胶板变形，导致样品泄漏。
  
• 电压为180V电泳时，每板胶的电流在50-80mA之间；电压为150V电泳时，每板胶的电流在40-70mA之间。随着时间增加电流会逐步降低。如果电流明显不在这一范围，需检查电泳液的质量，及内槽电泳液是否有漏液现象。
  • 实际电流与电泳电源、电泳液质量、凝胶数量等因素有关。
• 湿转时300-400mA恒定电流转膜30～60分钟，随着时间增加电压会逐步降低，例如从约150-200V降低到100-150V左右。为达到更好的转膜效果，可以根据预制胶上残留的预染marker及膜上的预染marker确定转膜效率，并对转膜条件进行适当调整。如果出现预制胶和膜上的预染marker都很少，说明蛋白有可能是转到膜外了。